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技術(shù)文章

plko 1 -亞克隆載體。

點擊次數(shù):17285   發(fā)布時間:2012/9/18 15:30:01

plko.1-trc克隆載體

財團干擾

1plko克隆載體骨干,技術(shù)聯(lián)盟(券)建了一個圖書館發(fā)夾針對15000和15000小鼠基因addgene正與真相與和解委員會使這個克隆載體提供給科學界。請舉北陸等人。,2006124(61283-98(醫(yī)學)在所有出版物引起使用這種載體。

1 plko數(shù)碼地圖

plko。1是一個不稱職的慢病毒載體選擇的真相與和解委員會表達發(fā)夾plko。1可引入細胞通過直接轉(zhuǎn)染,或可轉(zhuǎn)換成慢粒子隨后感染靶細胞系。一經(jīng)推出嘌呤霉素抗性標記編碼plko 1允許方便穩(wěn)定的選擇。

圖1:1 plko含有插入plko.1-trc克隆載體有一1.9kb填充物是由消化上井和限制性。核苷酸克隆到上井限制性網(wǎng)站中的填充物。上井現(xiàn)場銷毀在大多數(shù)情況下取決于靶序列),限制性網(wǎng)站保存一個完整的地圖plko。1載1.9kb填塞,訪問www.addgene.org/10878。

描述向量元素

U 6U 6啟動子驅(qū)動聚合酶轉(zhuǎn)錄三記錄

cppt中央polypurine,cppt,改善傳導效率,促進核進口的載體國家的復雜的細胞的轉(zhuǎn)

hpgk人力磷酸激酶啟動子驅(qū)動表達嘌呤。

嘌呤霉素抗性基因選擇選擇plko 1質(zhì)粒在哺乳動物細胞中。

3 ''ltr 3 ' '長末端重復

F1F1細菌復制的起源。

安培氨芐青霉素抗性基因選擇plko 1質(zhì)粒在細菌細胞

市局市局細菌復制的起源。

5 ''ltr 5長末端重復。

轉(zhuǎn)速反應元件。

圖2:細節(jié)插入。U 6啟動子指導核糖核酸轉(zhuǎn)錄聚合酶三。包含21個“意義”的基礎是相同的目標基因,一個環(huán)包含一個xhoi限制的網(wǎng)站和21的”的基礎,是相輔相成的意義基地其次是polyt終止序列聚合酶三。

. 3的相關(guān)產(chǎn)品

以下質(zhì)粒可addgene建議使用與plko 1 trc-cloning向量。

質(zhì)粒addgene身份#描述

plko。1 -真相與和解委員會的控制(10879陰性對照載體插入發(fā)夾。

plko。1 -爭奪(1864陰性對照載體。

pspax2(12260包裝質(zhì)粒生產(chǎn)病毒顆粒。

pmd2。(12259信封質(zhì)粒生產(chǎn)病毒顆粒

注:plko。1也可以用來與包裝質(zhì)粒pcmv-dr8.2addgene # 8455)和包膜質(zhì)粒pcmv-vsvgaddgene # 8454)從羅伯特溫伯格的實驗室。更多信息,訪問addgene哺乳動物干擾工具頁

其他幾個實驗室已經(jīng)plko衍生載體,也可能是有用的實驗看到這些載體,訪問addgene的網(wǎng)站和搜索”plko

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B .設計1 plko寡核苷酸。

B . 1確定*佳21濱海目標在你的基因

選擇合適的21濱海目標基因的步是有效的基因沉默方法選擇目標的不斷提高。以下是建議為目標的選擇

1。使用中的選擇工具來確定一組得分的目標,你的基因。例如,懷特海生物醫(yī)學研究所主辦了一個基因選擇程序,可以訪問后,免費注冊網(wǎng)址/ /侏羅。麻省理工學院。/ bioc / sirnaext /。如果你有機會另一個很好的程序irnai,是免費提供的公司mekentosj網(wǎng)址http : / / / www.mekentosjirnai /。

總結(jié)準則設計的siRNA與有效的基因沉默是包含在這里

25nt下游的起始密碼子(球蛋白),搜索21nt序列匹配模式機管局n19如果沒有合適的匹配,搜索納爾*新ynn,沒有任何核苷酸嘌呤,克),是一個嘧啶(丙。

氣相色譜法的內(nèi)容應該是36-52 %。

3應具有較低的穩(wěn)定性至少一一之間的位置- 19。

避免針對內(nèi)含子

避免4個或多個核苷酸重復,尤其因為重復polyt終止信號的核糖核酸聚合酶三。

2。減少退化的目標基因,利用美國高爐項目選擇序列,至少有3個核苷酸錯配的所有基因無關(guān)

addgene建議你選擇多目標序列為每個基因。一些序列將

原創(chuàng)作者:上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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