農(nóng)藥殘留的免疫學(xué)技術(shù)檢測食品的范圍很廣,包括水果、蔬菜、飲料、啤酒、葡萄酒、乳、肉、動(dòng)植物油、蜂蜜、豆類、谷物等。國外還推出了多種酶標(biāo)試劑盒應(yīng)用于常規(guī)分析及田間檢測的快速篩選,作為儀器分析的輔助方法發(fā)揮了一定的作用。免疫分析法作為農(nóng)藥殘留快速篩選檢測方法受到重視。
免疫技術(shù)為20世紀(jì)90年代優(yōu)先研究、開發(fā)和利用的農(nóng)藥殘留分析技術(shù),世界糧農(nóng)組織(FAO)已向許多國家推薦此項(xiàng)技術(shù)。免疫分析法(immunoassay,IA)是將免疫反應(yīng)與現(xiàn)代測試手段相結(jié)合而建立的超微量測定技術(shù)。
免疫分析法是生物酶技術(shù)、熒光光譜技術(shù)、輻射技術(shù)、免疫分析技術(shù)應(yīng)用于農(nóng)藥殘留分析領(lǐng)域的一門新技術(shù),是基于抗原和抗體之間的特異性識別和結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的一種微量分析方法。免疫是機(jī)體識別和排除進(jìn)人體內(nèi)的抗原性異物的保護(hù)性應(yīng)答反應(yīng)。較大分子的農(nóng)藥可以直接作為抗原進(jìn)入脊椎動(dòng)物的體內(nèi)產(chǎn)生免疫應(yīng)答,從而得到可以和該農(nóng)藥分子特異性結(jié)合的抗體;小分子量的農(nóng)藥(相對分子質(zhì)量<2500)一般不具備免疫原性,不能刺激動(dòng)物產(chǎn)生免疫反應(yīng),但有與相應(yīng)抗體在體外發(fā)生吸附反應(yīng)的能力,即有反應(yīng)原性,這類小分子物質(zhì)在免疫學(xué)上稱為半抗原。
農(nóng)藥是半抗原,一般不具備抗原性,不能刺激動(dòng)物產(chǎn)生免疫反應(yīng),需要首先將該小分子通過與一定碳鏈長度、大分子的載體蛋白質(zhì)(通常使用牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、鑰孔血藍(lán)蛋白、卵清蛋白)以共價(jià)鍵偶聯(lián)制備成人工抗原,使動(dòng)物產(chǎn)生免疫反應(yīng),產(chǎn)生識別該農(nóng)藥并與之特異性結(jié)合的抗體。以共價(jià)鍵偶聯(lián)成人工抗原使動(dòng)物產(chǎn)生免疫反應(yīng)從而產(chǎn)生識別該農(nóng)藥并與之相結(jié)合的抗體(多克隆抗體),通過對半抗原或抗體進(jìn)行標(biāo)記(酶、熒光物質(zhì)、放射性同位素等),利用標(biāo)記物的生物、物理、化學(xué)放大作用,對樣品中的特定的農(nóng)藥殘留進(jìn)行定性或定量檢測。
通過對半抗原或抗體進(jìn)行標(biāo)記(放射性核素、酶、熒光素標(biāo)記等),利用標(biāo)記物的生物或物理或化學(xué)放大作用來進(jìn)行工作,它集測定的高靈敏性和抗體反應(yīng)的強(qiáng)特異性于一體。它的開發(fā)過程需要投入較多資金和較長時(shí)間,但具有簡單、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、價(jià)廉、樣品所需量少等優(yōu)點(diǎn)。目前多用于單一農(nóng)藥殘留檢測,不適合應(yīng)用于多殘留檢測。
1971年Ercegovich[塢。]*先討論了農(nóng)藥DDT、馬拉硫磷及氨三唑(amino—triazole)的免疫測定。隨后,大量研究免疫分析法在農(nóng)藥殘留中的應(yīng)用。Kun等報(bào)道了利用免疫分析測定對硫磷殺蟲劑農(nóng)藥殘留,檢測限達(dá)到26ng/mL,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10 9/6。Laura等[塢0]報(bào)道利用化學(xué)發(fā)光免疫分析(cL—IA)測定農(nóng)藥殘留。Anne等報(bào)道用非同位素免疫分析法(cMIA)測定氯麥隆殺蟲劑,采用傅里葉變換紅外光譜(FTIR)作為檢測器,極大提高靈敏度。
農(nóng)藥殘留的免疫學(xué)技術(shù)檢測食品的范圍很廣,包括水果、蔬菜、飲料、啤酒、葡萄酒、乳、肉、動(dòng)植物油、蜂蜜、豆類、谷物等。一些商品化的試劑盒也相繼開發(fā)出來。國家農(nóng)業(yè)部環(huán)保所李治祥和黃土忠于1990年研制了農(nóng)藥殘毒速測箱,其原理就是有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對動(dòng)物和昆蟲的致毒作用是通過特異性抑制膽堿酯酶(chE)來實(shí)現(xiàn)的。將chE與樣品提取液反應(yīng),若chE受到抑制,表明樣品提取液中含有OPS和氨基甲酸酯類農(nóng)藥,這時(shí)基質(zhì)不能水解,就不能變色;否則ChE不受到抑制,基質(zhì)水解產(chǎn)生藍(lán)色。另外,國外還推出了多種酶標(biāo)試劑盒應(yīng)用于常規(guī)分析及田間檢測的快速篩選,作為儀器分析的輔助方法發(fā)揮了一定的作用。免疫分析法作為農(nóng)藥殘留快速篩選檢測方法受到重視。
原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司