搞真菌基因功能研究的不可避免的總要涉及到DNA和RNA提取，由于真菌中有較多的多糖成分影響到所提DNA和RNA的質(zhì)量和后續(xù)的分析。因此一個高質(zhì)量的、實惠的提取方法是我們的優(yōu)先選擇，在此分享一下我一直在用的提取方法，供大家參考。
真菌DNA的提取（方法一）
1.取真菌菌絲0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉
2.加入4mL提取液，快速振蕩混勻
3.加入等體積的4mL的氯仿:異戊醇（24:1），渦旋3～5min（此處是粗提沒有加酚，可以節(jié)約成本的喲�。�
4.1000rpm，4℃，5min
5.上清用體積的氯仿:異戊醇（24:1）再抽提一次（10,000 rpm，4℃離心5 min）
6.取上清，加入2/3倍體積的-20℃預(yù)冷異丙醇或2.5倍體積的無水乙醇沉淀, 混勻, 靜置約30 min
7.用毛細玻棒挑出絮狀沉淀, 用75%乙醇反復(fù)漂洗數(shù)次, 再用無水乙醇漂洗1次, 吹干，重懸于500 ulTE中
8.加入1 ul RNaseA （10 mg/mL），37℃處理1 hr
9.用酚（pH8.0）:氯仿:異戊醇（25:24:1）和氯仿:異戊醇（24:1）各抽提1次（10,000 rpm，4℃離心5 min）
10.取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V體積的無水乙醇, -70℃沉淀30 min以上
11.沉淀用75%乙醇漂洗，風(fēng)干, 溶于200 ulTE中，-20 ℃保存?zhèn)溆?br />DNA提取液：0.2M Tris-HCl（pH 7.5），0.5M NaCl，0.01M EDTA，1％SDS，
3M NaAc
TE：10 mmol/L Tris-HCl pH8.0，1 mmol/L EDTA
酚（pH8.0）:氯仿:異戊醇（25:24:1）
氯仿:異戊醇（24:1）
異丙醇
無水乙醇
75%乙醇
RNaseA

真菌DNA的提�。ǚ椒ǘ�）
1.真菌菌絲0.5-1 g, 在液氮中迅速研磨成粉
2.加入3 mL 65℃預(yù)熱的DNA提取緩沖液，快速振蕩混勻65℃水浴30 min, 期間混勻2-3次
3．加入1 mL 5M KAc，冰浴20 min
4．等體積的氯仿:異戊醇（24:1）抽提1次（10,000 rpm，4℃離心5 min）
5．取上清，加入2/3倍體積的-20℃預(yù)冷異丙醇, 混勻, 靜置約30 min
6．用毛細玻棒挑出絮狀沉淀, 用75%乙醇反復(fù)漂洗數(shù)次, 再用無水乙醇漂洗1次, 吹干，重懸于500 L TE中
7．加入1 ul RNaseA （10 mg/mL），37℃處理1 hr
8．用酚（pH8.0）:氯仿:異戊醇（25:24:1）和氯仿:異戊醇（24:1）各抽提1次（10,000 rpm，4℃離心5 min）
9．取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V體積的無水乙醇, -70℃沉淀30 min以上
10．沉淀用75%乙醇漂洗，風(fēng)干, 溶于200 ul TE中，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?br />DNA提取緩沖液：100 mM Tris-HCl（pH8.0）,20 mM EDTA（pH8.0）,1.5 M NaCl, 2% CTAB（W/V）,4% PVP40（W/V）和2% 巰基乙醇（V/V），PVP和巰基乙醇使用前加入
5M KAc

方法一和二，是大同小異。主要是DNA提取液配方不一樣！成本也不一樣的喲！
奇怪的是鴨鴨上怎么沒辦法輸入微升的符號！只有用ul代替了！
真菌菌絲的總RNA的提取
RNA提取緩沖液（CTAB）：2% CTAB（W/V），2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100 mM Tris-HCl（pH8.0,DEPC處理的水配置），25mM EDTA, 0.5g/L 亞精胺Spermidine，2.0M NaCl，2%巰基乙醇（V/V，使用前加入）。由于在高溫滅菌條件下，Tris-HCl要和DEPC發(fā)生反應(yīng)，所以配RNA提取緩沖液時直接用DEPC 處理的水配制即可。
SSTE：1 M NaCl，0.5% SDS（W/V），10 mM Tris-HCl pH8.0，1.0 mM EDTA
10M LiCl 直接用蒸餾水配10M LiCl，加1‰的DEPC過夜后，高溫滅菌。
3M NaAc
氯仿:異戊醇（24:1）
酚（pH4.5）:氯仿:異戊醇（25:24:1）
DEPC處理水 用1‰的DEPC處理蒸餾水過夜，高溫滅菌
無水乙醇
70%酒精
1. 實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱，離心管中加入ME（巰基乙醇）（10mL加80ul，50mL中加入300ul）。
2.取約0.8g菌絲體（液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了），在液氮中迅速磨成精細粉末，裝入50 mL離心管，按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液，顛倒混勻。
3. 65℃水浴3-10 min，期間混勻2-3次
4. 加入等體積的酚（注意是酸酚pH4.5）:氯仿:異戊醇（25:24:1）抽提（10,000 rpm，4℃，5 min）
5. 取上清，等體積的氯仿:異戊醇（24:1）抽提（10,000 rpm，4℃，5 min）
6. 加入1/4V體積10M LiCl溶液，4℃放置6hr以上（或過夜）
7. 10,000 rpm，4℃離心20 min
8. 棄上清，用500 ulSSTE溶解沉淀
9. 酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）抽提兩次, 氯仿:異戊醇（24:1）抽提1次（10,000 rpm，4℃，5 min）
10. 加2V體積的無水乙醇，在-70℃冰箱沉淀30 min以上
11. 12,000 rpm，4℃離心20 min
12. 棄上清。沉淀用70%酒精漂洗一次，干燥
13. 加200 ul的DEPC處理水溶解
14. 用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
（在抽提過程中，若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多，可以增加抽提次數(shù)）
注意：提取RNA請盡量在低溫下操作，如果條件不容許，在室溫下操作的時間要盡可能的短。

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司