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上海恒遠(yuǎn)分析慢病毒轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法

點(diǎn)擊次數(shù):15481   發(fā)布時(shí)間:2013/6/17 10:00:27

一、慢病毒轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法

 1、慢病毒轉(zhuǎn)染前18-24小時(shí),將貼壁細(xì)胞以1×10^5/孔鋪到24孔板中。使細(xì)胞在慢病毒轉(zhuǎn)染時(shí)的數(shù)量為2×10^5/孔左右。

 2、第二天,用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鮮培養(yǎng)基替換原培養(yǎng)基,加入適量病毒懸液。37℃孵育。

 3、(對polybrene毒性敏感的細(xì)胞選作此步驟)4小時(shí)后加入2ml新鮮培養(yǎng)基以稀釋polybrene。

 4、繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí),用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基。

 5、繼續(xù)培養(yǎng)。如果慢病毒含有熒光蛋白,一般轉(zhuǎn)染48小時(shí)后可見明顯熒光表達(dá),72小時(shí)后更加明顯。如需FACS檢測轉(zhuǎn)染效率,可在轉(zhuǎn)染后72-96小時(shí)進(jìn)行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加藥篩選,可以在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥。

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