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上海恒遠(yuǎn)與您分享酵母細(xì)胞RNA的提取與沉淀分離

點擊次數(shù):15171   發(fā)布時間:2013/10/10 11:34:15

酵母細(xì)胞置于含有SDS的緩沖溶液中,加等體積的苯酚水溶液,通過激烈振蕩一段時間,將RNA和蛋白質(zhì)分開,然后離心分層,RNA溶于上層水溶液中,DNA和蛋白質(zhì)在酚相。RNA可用乙醇沉淀析出。

一、原理:酵母細(xì)胞置于含有SDS的緩沖溶液中,加等體積的苯酚水溶液,通過激烈振蕩一段時間,將RNA和蛋白質(zhì)分開,然后離心分層,RNA溶于上層水溶液中,DNA和蛋白質(zhì)在酚相。RNA可用乙醇沉淀析出。
二、材料與試劑:新鮮濕酵母、SDS-Tris緩沖液(0.3%SDS,0.01MMgCL2,0.1MTris,用HCL調(diào)至PH7.2)、苯酚水溶液(90%,W/V)、20%乙酸鉀水溶液、95%乙醇
三、操作方法
1、取10ml酵母濃縮液(約5g左右濕酵母),加入4mlSDS-Tris緩沖液,再加入6ml90%苯酚水溶液。
2、在室溫激烈振蕩1h,然后冷卻至0-4℃,以下操作均在0-4℃進(jìn)行。
3、上述提取液以4000r/min,離心5min。
4、分離出上層水相加入1/10體積的乙酸鉀溶液,再加入2倍體積的95%乙醇。在-16℃作于放置使rna沉淀析出。此沉淀可在冰箱中長期保存。

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