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2014最新人半胱氨酸蛋白酶抑制劑ELISA試劑盒操作說明

點(diǎn)擊次數(shù):15141   發(fā)布時(shí)間:2013/11/8 8:49:14

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人半胱氨酸蛋白酶抑制劑elisa試劑盒操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在 37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻
時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符
合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?瞻卓准訕悠废♂屢100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測
樣品 100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板
加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120 分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A 工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加
上覆膜, 37℃反應(yīng) 60 分鐘。
3. 溫育60 分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3 次,每次浸泡 1-2 分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也
可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B 工作液(同檢測A 工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng) 60 分鐘。
5. 溫育60 分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5 次,每次浸泡 1-2 分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍
將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜 37℃避光顯色(30 分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4
孔有明顯的梯度蘭色,后3-4 孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入
順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm 波長依序測量各孔的光密度(OD 值)。 在加終止液后立即進(jìn)行檢測。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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