聯(lián)系我們/CONTACT US

聯(lián)系人：錢經(jīng)理

電話：13636351217

手機(jī)：13636351217，13636351073

地址：上海市松江臨港科技城漢橋文化科技園B座

郵編：201615

傳真：021-64881400

郵箱：2881726255@qq.com

阿儀網(wǎng)商鋪：http://www.app17.com/c60514/

手機(jī)網(wǎng)站：m.shhyswkj.com

產(chǎn)品分類/PRODUCT CLASS

技術(shù)文章

無血清培養(yǎng)基的使用方法

點(diǎn)擊次數(shù)：15113 發(fā)布時(shí)間：2015/2/10 11:05:37

使用方法

目前，血清仍是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中*基本的的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或者細(xì)胞生長(zhǎng)狀況不良時(shí)，常常會(huì)先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，待細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛以后，再換成無血清培養(yǎng)液。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個(gè)適應(yīng)過程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生變化，是否有部分細(xì)胞死亡，存活細(xì)胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。在實(shí)驗(yàn)后這些細(xì)胞一般不再繼續(xù)保留，很少有細(xì)胞能夠長(zhǎng)期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前，要留有種子細(xì)胞，種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。

為了使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)，關(guān)鍵的是使所培養(yǎng)細(xì)胞：

1.處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期

2.>90% 活細(xì)胞率

3.適應(yīng)時(shí)以較高的起始細(xì)胞接種

細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的方法

1.直接適應(yīng)——細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中。

一些類型細(xì)胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。對(duì)于直接適應(yīng)，接種細(xì)胞密度應(yīng)該:2.5×105~3.5×105細(xì)胞/ml。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml時(shí)，傳代培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞密度在培養(yǎng)4到7天后達(dá)到2×106~4×106細(xì)胞/ml時(shí)，細(xì)胞完全適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml，細(xì)胞活率在90％時(shí)，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。

2.連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中，與直接適應(yīng)相比較，連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩?xì)胞更加溫和一些。

（1）以2倍正常接種密度接種生長(zhǎng)活躍的細(xì)胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基：25％SFM 混合培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)。

（2）當(dāng)細(xì)胞密度>5×105細(xì)胞/ml時(shí)，以2×105到3×105細(xì)胞/ml細(xì)胞密度，在有血清培養(yǎng)基：SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。

（3）以2×106到3×106細(xì)胞/ml細(xì)胞密度，25％有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。

（4）當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml（接種后4到6天），在100％SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。

（5）每隔3到5天，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml，細(xì)胞活率在90％時(shí)，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。

建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物，直到每一次細(xì)胞適應(yīng)了新的混合培養(yǎng)基。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進(jìn)行幾次傳代。

在適應(yīng)過程中，不要讓細(xì)胞生長(zhǎng)過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意，與有血清培養(yǎng)基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白質(zhì)，因而更易于受外界因素的影響。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司

阿儀網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作，未經(jīng)允許翻錄必究. 聯(lián)系人：錢經(jīng)理　聯(lián)系電話：13636351217 ICP備案號(hào)：滬ICP備11004148號(hào)-11 總訪問量：9098684 管理登錄

主營(yíng)產(chǎn)品：ELISA試劑盒、人ELISA試劑盒、大鼠ELISA試劑盒、小鼠ELISA試劑盒、生物試劑、抗體、血清、進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品、微生物培養(yǎng)基

掃一掃，關(guān)注我們！

第14年

阿儀網(wǎng)推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站

色AV综合AV综合无码网站,国产又粗又黄又爽又硬的图片,亚洲日韩精品无码专区网址,АⅤ天堂中文在线

主營(yíng)產(chǎn)品：

聯(lián)系我們/CONTACT US

產(chǎn)品分類/PRODUCT CLASS

澳洲血清

美國(guó)進(jìn)口血清

ELISA試劑盒

ABCAM抗體

Spectrum試劑

進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品

Amresco試劑

其它方法測(cè)試盒

免疫化學(xué)品

金標(biāo)試劑盒

食品檢測(cè)試劑盒

代理品牌

技術(shù)文章

無血清培養(yǎng)基的使用方法

推薦產(chǎn)品