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討論ELISA試劑盒實驗中的顯色問題

點擊次數(shù)：14820 發(fā)布時間：2015/7/20 14:21:48

elisa試劑盒試驗中顯色是ELISA中的*后一步溫育反應(yīng)，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。上海恒遠(yuǎn)在此和你一起討論ELISA試劑盒實驗中的顯色問題。
試驗中反應(yīng)的溫度和時間是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴(yán)格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時間，及時判斷。

OPD 底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30 分鐘后即不再加深，再延長反應(yīng)時間，可使本底值增高。OPD 底物液受光照會自行變色，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進行，顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng)。OPD 產(chǎn)物用硫酸終止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。

TMB 受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果。T MB 經(jīng)HRP 作用后，約40 分鐘顯色達頂峰，隨即逐漸減弱，至2 小時后即可完全消退至無色。TMB 的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時間（12-24 小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。

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原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司