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技術(shù)要點(diǎn)：ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)過程之顯色

點(diǎn)擊次數(shù)：14699 發(fā)布時間：2015/10/16 10:38:57

上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司主要經(jīng)營 elisa試劑盒 、生物試劑、血清、抗體、培養(yǎng)基等科研產(chǎn)品。產(chǎn)品種類齊全，暢銷國內(nèi)大部分地區(qū) ，銷售額逐年穩(wěn)步提高。我司擁有雄厚的實(shí)力、合理的價格和優(yōu)良的服務(wù)，能夠及時解決和滿足客戶的各方面的需求。ELISA試劑盒是我司的主打產(chǎn)品，在ELISA實(shí)驗(yàn)中，每個步驟都需認(rèn)真對待，才能使實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確無誤！下面讓我們一起了解ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)過程之顯色！
顯色是ELISA中的*后一步溫育反應(yīng)，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強(qiáng)。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行。在定量測定中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測定的顯色可在室溫進(jìn)行，時間一般不需要嚴(yán)格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時間，及時判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深，再延長反應(yīng)時間，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行，顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用酸終止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。
TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達(dá)頂峰，隨即逐漸減弱，至2小時后即可完全消退至無色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和SDS等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時間（12-24小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司