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ELISA試驗(yàn)洗滌步驟注意事項(xiàng)-上海恒遠(yuǎn)

點(diǎn)擊次數(shù)：14865 發(fā)布時(shí)間：2016/8/30 9:27:26

洗滌在 ELISA 過(guò)程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。
ELSIA 就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離的和結(jié) 合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。可以說(shuō)在 ELISA 操作中，洗滌是*主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌，不得馬虎。洗滌的方式除某些 ELISA 儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種，過(guò)程如下：

（1）浸泡式ELISA 洗滌：
a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；
b.用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去）；
c.浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置 1-2 分鐘，間歇搖動(dòng)，浸泡時(shí)間不可隨意縮短；
d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)徹底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；
e.重復(fù)操作 c 和 d，洗滌 3-4 次（或按說(shuō)明規(guī)定）。
在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán)，也含親水基團(tuán)，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合，并借助于親水基團(tuán) 和水分子的結(jié)合作用，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫 20，其濃度可在 0.05%-0.2%之間，高于 0.2%時(shí)，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。

（2）流水沖洗式ELISA 洗滌，流水沖洗法*初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來(lái)水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗，持續(xù)沖洗 2 分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡 2 分鐘，吸干即可。
浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為徹底，且也簡(jiǎn)便、快速。已有實(shí)驗(yàn)表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司