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ELISA試劑盒、人ELISA試劑盒、大鼠ELISA試劑盒、小鼠ELISA試劑盒、生物試劑、抗體、血清、進口標(biāo)準(zhǔn)品、微生物培養(yǎng)基
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技術(shù)文章

人胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)酶聯(lián)免疫分析

點擊次數(shù):15558   發(fā)布時間:2012/3/9 9:12:57

人胰島素樣生長因子-(IGF-酶聯(lián)免疫分析

     本試劑盒僅供研究使用。

 藥品名稱:

通用名:人胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織或其它相關(guān)組織液中胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用夾心法測定標(biāo)本中胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)水平。用純化的人胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)受體包被微孔板,往微孔中依次加入胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ),再與HRP標(biāo)記的羊抗人受體結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)抗原濃度。
試劑盒組成

1
20倍濃縮洗滌液
30ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標(biāo)試劑
6ml×1瓶
8
標(biāo)準(zhǔn)品(240μg/L)
0.5ml×1瓶
3
酶標(biāo)包被板
12孔×8條
9
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張 
6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個

標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進行實驗。
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
3.可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作步驟
1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180μg/L,120μg/L ,60μg/L,30μg/L,15μg/L)。
2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
 
計算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.嚴格按照說明書操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
7.本試劑不同批號組分不得混用。底物請避光保存。
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)
檢測范圍:
10μg/L -200μg/L
規(guī)格:
96人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月
 
 

原創(chuàng)作者:上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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