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ELISA試劑盒、人ELISA試劑盒、大鼠ELISA試劑盒、小鼠ELISA試劑盒、生物試劑、抗體、血清、進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品、微生物培養(yǎng)基
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產(chǎn)品分類(lèi)/PRODUCT CLASS

澳洲血清

美國(guó)進(jìn)口血清

ELISA試劑盒

ABCAM抗體

Spectrum試劑

進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品

Amresco試劑

其它方法測(cè)試盒

免疫化學(xué)品

金標(biāo)試劑盒

食品檢測(cè)試劑盒

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技術(shù)文章

人白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒 使用說(shuō)明書(shū)

點(diǎn)擊次數(shù):15240   發(fā)布時(shí)間:2012/7/31 11:09:33

原理

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 LIF 單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 LIF與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人LIF,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,*后加終止液硫酸,在450nm處測(cè)OD值,LIF濃度與OD值成正比,可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中LIF濃度。       試劑盒組成2-8℃保存)  

酶標(biāo)Coated Wells

96

酶標(biāo)抗體工作液(Enzyme Conjugate

12ml

10×標(biāo)本稀釋液(Sample Buffer

12ml

20×濃縮洗滌液(Wash Buffer

50ml

標(biāo)準(zhǔn)品Standards40ng/

2

底物工作液(TMB Solution

12ml

抗體工作液(Biotinylated Antibody

12ml

終止液Stop Solution

12ml

        

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1. 收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8保存48小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20 -70 )保存,避免反復(fù)凍融。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成40ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)8管,管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在管中加入40ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?/span>中吸出500ul棄去。第八為空白對(duì)照。

3. 10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋?zhuān)?/span>示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。

4. 洗滌液:用重蒸水1:20稀釋?zhuān)ㄊ纠?font face="Arial">1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

檢測(cè)程序

1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37120分鐘。

2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。

3. 每孔中加入抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置3760分鐘。

4. 洗板:同前。

5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置3730分鐘。

6. 洗板:同前。

7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 暗處反應(yīng)15分鐘。

8. 每孔加入100ul終止液混勻。

9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。

結(jié)果計(jì)算與判斷

1. 所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。

2. 以標(biāo)準(zhǔn)品4000、20001000、500、250、125、62.50 pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)LIF含量。

試劑盒性能

1. 靈敏度*小的LIF 檢測(cè)濃度小于30pg/ml。

2. 特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人LIF。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板見(jiàn)變異系數(shù)均小于10%。

注意事項(xiàng)

1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。

3. 板條開(kāi)封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。

4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

5. 本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!                                           本公司經(jīng)營(yíng)進(jìn)口Elisa試劑盒、酶、細(xì)胞等生物化學(xué)試劑。價(jià)格實(shí)惠,質(zhì)量保證。歡迎咨詢(xún)18221656311                                         

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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